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                      間質膠原酶的化學本質是一種蛋白質

                      發布時間: 2022-09-21  點擊次數: 588次
                         間質膠原酶為膠原蛋白水解酶,可以在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構,而不損傷其它蛋白質和組織。膠原酶的化學本質是一種蛋白質,因此,它對溫度、PH和導致蛋白質變性的各種因素均非常敏感,極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質。
                        
                        膠原酶是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內含較多結締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。膠原酶僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為最終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。
                        
                        間質膠原酶的使用:
                        1、將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊。
                        2、將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。
                        3、將燒瓶放入37°C水浴或者37°C孵箱內,每隔3min振搖-次,如能放在37°C的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時間與組織的類別很有關系,對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織,消化時間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37°C震蕩消化15~45min,也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經搖動即成細胞團或單個細胞,可以認為已消化充分。上皮組織經膠原酶消化后,由于上皮細胞對此酶有耐受性,可能仍有一些細胞團未*分散,但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生長,因此,如無特殊需要可以不必再進一步處理。
                        4、收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養液制成細胞懸液,接種培養瓶。
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